Методы определения чувствительности к антибиотикам. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.

Методы определения чувствительности к антибиотикам. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам:

1)Диффузионные методы

-с использованием дисков с антибиотиками

-с помощью Е-тестов

2)Методы разведения

-разведение в жидкой питательной среде (бульоне)

-разведение в агаре

Культуры микроорганизмов, выделенные у больных, в настоящее время обязательно проверяют на чувствительность к антибиотикам, используемым для лечения. Это позволяет более рационально проводить антибиотикотерапию. Проверка чувствительности микробов к антибиотикам тем более необходима, что в последние годы появились штаммы микроорганизмов, устойчивые к различным антибиотикам.

Для определения чувствительности микробов к антибиотикам существуют различные методы, среди которых наиболее распространены методы диффузии в агар (метод дисков) и метод последовательных разведений в жидкой или плотной питательной среде.

Метод диффузии в агар, или метод дисков. Испытуемую культуру засевают сплошным газоном на поверхность чашки Петри с мясопептонным агаром. Затем на поверхность агара помещают диски, пропитанные растворами антибиотиков (рис. 26).

Диски готовят из специального картона диаметром 6 мм. Содержание антибиотика в диске указывается на этикетке и соответствует рекомендации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ). Действие антибиотиков оценивают по феномену задержки роста вокруг диска после инкубации в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. В зависимости от диаметра зоны задержки роста различают степень чувствительности испытуемого штамма: чувствительные (более 10 мм), малочувствительные (менее 10 мм) и устойчивые (отсутствие зоны). Вместо дисков при определении чувствительности микробов можно использовать цилиндрики (фарфоровые или металлические), куда заливают растворы антибиотика разной концентрации.

Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Метод последовательных разведений антибиотиков. Готовят серию двукратных разведений антибиотика в жидкой или плотной питательной среде, а затем в пробирки или на поверхность чашек Петри с каждым из разведений засевают испытуемую культуру микробов.Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35о-37оС проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).Минимальная подавляющая концентрация (МПК) - наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая invitro полностью подавляет видимый рост бактерий.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам:

• Использование дисков с антибиотиками
• Помощью Е-тестов
• Разведение в жидкой питательной среде (булоне)
• Разведение в агаре

Культуры микроорганизмов, выделенные у больных, в настоящее время обязательно проверяют на чувствительность к антибиотикам, используемым для лечения. Это позволяет более рационально проводить антибиотикотерапию.

Проверка чувствительности микробов к антибиотикам тем более необходима, что в последние годы появились штаммы микроорганизмов, устойчивые к различным антибиотикам.

Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам

Для определения чувствительности микробов к антибиотикам существуют различные методы, среди которых наиболее распространены методы диффузии в агар (метод дисков) и метод последовательных разведений в жидкой или плотной питательной среде.

Метод диффузии в агар, или метод дисков

Испытуемую культуру засевают сплошным газоном на поверхность чашки Петри с мясопептонным агаром. Затем на поверхность агара помещают диски, пропитанные растворами антибиотиков (рис. 26).

Диски готовят из специального картона диаметром 6 мм. Содержание антибиотика в диске указывается на этикетке и соответствует рекомендации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ).

Действие антибиотиков оценивают по феномену задержки роста вокруг диска после инкубации в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. В зависимости от диаметра зоны задержки роста различают степень чувствительности испытуемого штамма:

• Чувствительные (более 10 мм)
• Малочувствительные (менее 10 мм)
• Устойчивые (отсутствие зоны)

Вместо дисков при определении чувствительности микробов можно использовать цилиндрики (фарфоровые или металлические), куда заливают растворы антибиотика разной концентрации.

Метод серийных разведений. Метод серийного разведения антибиотик в бульоне

Готовят ряд убывающих разведений антибиотика в пробирках с бульоном (кратные 2). В пробирки добавляют испытуемую культуру Контролем служит пробирка с бульоном и культурой без антибиотика.

Через сутки инкубации в термостате определяют МПК, которая соответствует концентрации препарата в последней пробирке с видимой задержкой роста. Для определения бактерицидного действия из нескольких пробирок с задержкой роста делают высев петлей на сектора чашки Петри с МПА. За бактерицидную концентрацию принимают концентрацию препарата в последней пробирке, высев из которой не дал роста.

Метод серийных разведений в плотной питательной среде.

Этот метод более чувствителен и точен. Каждый антибиотик испытывают в трех концентрациях (исходя из уровней чувствительности микроорганизмов), которые добавляют к расплавленному и охлажденному агару. Агар с антибиотиками разливают в три чашки Петри (по одной чашке на каждую концентрацию). Контролем служит чашка с агаром без антибиотика. Посев производят петлей или лучше штампом-репликатором, который позволяет одновременно определить чувствительность к трем концентрациям антибиотика 25-50 культур (в зависимости от числа лунок в штампе). Учет производят спустя сутки роста в термостате. Культура считается чувствительной, если на месте посева нет ни одной колонии. Микроорганизмы, рост которых подавлен всеми 3 концентрациями, рассматривают как чувствительные (в этом случае можно применять антибиотик в терапевтической дозе) - 2-й и 3-й концентрациями, как среднечувствительные (антибиотик можно применять только в увеличенной дозе) - 3-й; как умеренно-устойчивые микроорганизмы (антибиотик можно применять только местно), растущие на всех трех концентрациях относят к устойчивым (антибиотик нельзя применять).

Чувствительность к антибиотикам таблица. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам

При использовании антибиотиков выраженный лечебный эффект достигается

в случае применения тех препаратов, к которым возбудитель наиболее чувствителен. Определение чувствительности возбудителя к антибиотикам проводится перед началом лечения и периодически – в ходе лечения. В настоящее время на практике используются следующие м етоды определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам.

Метод серийных разведений в жидких средах . В жидкие среды с серийными разведениями антибиотиков вносят исследуемую культуру, инкубируют посевы 10-18 часов при 37°С, и учитывают результаты визуально или нефелометрически. Иногда в среду добавляют глюкозу и индикатор, что позволяет учитывать результаты по изменению окраски среды. Этот метод позволяет установить минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) или минимальную подавляющую концентрацию (МПК) препарата для конкретного возбудителя. Исследование можно выполнять в различных объемах питательной среды - от 1 до 10 мл; в качестве питательной среды обычно используют МПБ или любую другую среду, соответствующую питательным потребностям возбудителя. В пробирках с питательной средой готовят серию двойных разведений антимикробного препарата. В качестве контроля используют пробирку с питательной средой без антибиотика. В каждую пробирку (с антибиотиком и контрольную) вносят суспензию бактерий с концентрацией 10⁶микробных клеток/мл. Пробирки инкубируют 10-18 часов при 37°С (или до появления бактериального роста в контрольной пробирке). По истечении указанного срока учитывают результаты. МПК соответствует наибольшему разведению препарата, тормозящему рост тест-культуры (рисунок 13.17).

Источник: https://antiseptik-dlya-dereva.aystroika.info/stati/podgotovka-k-analizu-na-chuvstvitelnost-k-antibiotikam-kak-poyavlyayutsya-superbakterii

Методы определения чувствительности к антибиотикам микробиология. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

Так как одним из важнейших принципов правильного лечения инфекционных заболеваний является выбор антибиотика, к которому возбудитель наиболее чувствителен, перед назначением антибиотиков проводится определение чувствительности возбудителя заболевания к антибиотикам, т.е. устанавливается антибиотикограмма.

Наиболее известны 3 метода:

1. Метод бумажных дисков на питательном агаре. В чашку Петри на питательный агар делают посев микробной взвеси. Избыток жидкости удаляют пипеткой. После впитывания взвеси в агар на засеянную поверхность пинцетом наносят 5-6 разных бумажных дисков с антибиотиками, диски отличаются по цвету. Чашки с дисками ставят в термостат при 37С на 18-20 часов. Антибиотики из дисков диффундируют в агар. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры судят о ее чувствительности к антибиотикам. Этот метод нельзя применять, если антибиотики плохо диффундируют в агар.Преимущество метода – можно определить чувствительность исследуемой бактериальной культуры сразу к нескольким антибиотикам.

2. Метод серийных разведений в МПБ. Готовят основной раствор антибиотика в соответствующем растворителе. Из основного раствора готовят последующие 2-хкратные разведения в бульоне. Обычно берут 12 пробирок по 1 мл МПБ в пробирке. После последовательных разведений антибиотика в МПБ, в каждую пробирку добавляют 0,1 мл взвеси клеток испытуемой бактериальной культуры, содержащей 10⁶-10⁷клеток. Посевы инкубируют в термостате 18-24 ч. Результаты отмечают по наличию роста . Если есть рост бактерий – среда мутная . Если нет роста бактерий – среда прозрачная . Если среда в пробирке мутная, то в данной концентрации антибиотик не действует , если прозрачная– антибиотик действует . По последней пробирке с прозрачной средой определяют минимальную ингибирующую дозу антибиотика . Одновременно ставят контрольные пробы : 1-ый контроль (контроль бактериальной культуры) - 1 мл МПБ + взвесь бактерийбез антибиотика, 2-ой контроль (контроль антибиотика) - 1 мл МПБ + антибиотик, нобез взвеси бактерий. В контрольных пробирках должны быть следующие результаты: 1-ый контроль – помутнение среды (есть рост); 2-ой контроль – среда прозрачная (нет роста). Для того, чтобы узнать какое действие оказал антибиотик (бактерицидное или бактериостатическое), петлей делают посевы из пробирок на сектора ПА. Роста нет – бактерицидное действие, рост есть – бактериостатическое действие.Преимущество метода – определение минимальной концентрации антибиотика, которая ингибирует (подавляет) рост бактериальной культуры.

Определение чувствительности к антибиотикам расшифровка. Анализ на посев мочи с определением чувствительности к антибиотикам

С целью выявления патогенной микрофлоры, обуславливающей развитие инфекционно-воспалительных процессов и обеспечения эффективного лечения, находит применение рутинный анализ , заключающийся в бактериологическом посеве мочи , с помощью которого определяется также чувствительность к антибиотикам .
Бактериологическое исследование относится к микробиологическим методам анализа и заключается в посеве образцов мочи на питательную среду, необходимую для роста бактериальной микрофлоры.
Анализ проводится для оценки качественного и количественного состава микроорганизмов , прежде всего, патогенных, а также условно-патогенных при содержании их в концентрациях, способствующих развитию инфекционных заболеваний мочеполовой системы .
Параллельно производится оценка чувствительности выявленных культур патогенных микроорганизмов к препаратам, относящимся к группе антибиотиков, выражающаяся в составлении антибиотикограммы.

Показания к анализу

• идентификация возбудителей инфекционных заболеваний мочеполовой системы, в том числе в случаях нетипичного протекания болезни;
• адекватный подбор лекарственных препаратов из ряда антибиотиков;
• оценка эффективности лечения, замены лекарства при наличии устойчивости к тому или иному препарату;
• проведение плановых проверок в программе ведения беременности;
• проверки у пациентов при длительной катетеризации.

Подготовка к исследованию

Подготовка к анализу заключается в соблюдении целого ряда требований :

• во временном прекращении приема мочегонных лекарственных препаратов в соответствии с рекомендациями врача;
• до начала курса лечения при назначении препаратов, относящихся к антибиотикам, антисептикам, противогрибковым препаратам;
• в выполнении гигиенических процедур, предшествующих сдаче мочи;
• для анализа пригодны образцы мочи, собранные после, как минимум, двух часов воздержания от опорожнения мочевого пузыря, представляющие среднюю порцию мочи;
• сбор мочи производится в стерильный сосуд с крышкой, обеспечивающей плотное его закрывание;
• время хранения материала - максимум два часа до начала собственно использования для анализа;
• образцы мочи могут быть получены с помощью катетера.

Результаты и их интерпретация

Результаты анализа выдаются обследуемому в виде бланка с указанием:

• перечня вошедших в анализ микроорганизмов и данных значений титра для каждого из них, выраженных в КОЕ на 1 мл пробы;
• наличия либо отсутствия роста - для каждого вида;
• степень чувствительности микробных культур к вошедшим в исследование антибиотикам, выраженной в терминах «чувствительный», «устойчивый», «умеренно-устойчивый».

Пределы референтных значений:

• титр меньше 10*2 – бактериурия низкая;
• значения титра в пределах 10*3 - 10*4 –бактериурия средняя;
• значения титра, превышающие 10*4, соответствуют высокой степени бактериурии; лишь в этом случае производится оценка чувствительности по отношению к антибиотику.

Интерпретация:

• норма - отсутствие роста патогенной микрофлоры;
• при выявлении более одного вида патогенных микроорганизмов - возможная контаминация образца, необходимость повторного прохождения анализа;
• выявление клинически значимой бактериурии - при значениях, превышающих 10*4.

Соблюдение необходимых требований к сдаче материала для анализа - залог получения достоверных значимых результатов, важных как с точки зрения диагностики заболевания, так и выбора адекватного лечения.

Чувствительность к антибиотикам расшифровка. Как появляются супербактерии

Миллионы лет бактерии борются за выживание. За это время они научились вырабатывать специальные механизмы, которые защищают их от угрожающих факторов внешней среды, других бактерий, вирусов, грибов и антибиотиков. Чтобы победить такие эволюционировавшие бактерии, приходится придумывать всё более мощные препараты.

Внутрибольничные инфекции

В январе 2014 года США от септического шока умерла женщина, которой не помог ни один из существующих антибиотиков. Сепсис вызвала супербактерия — Klebsiella pneumoniae.

Супербактерии — это микроорганизмы, устойчивые ко всем известным антибиотикам. Ежегодно по их вине умирает около 700 тысяч человек. По прогнозам учёных, к 2030 году цифра может достичь 10 миллионов.

Врачам не удалось установить, где именно женщина заразилась такой неуязвимой бактерией, но известно, что незадолго до болезни пациентка сломала ногу и попала в больницу. Скорее всего, заражение произошло именно там.

Дело в том, что в больницах применяют широкий спектр антибактериальных препаратов, поэтому бактерии вырабатывают устойчивость сразу ко многим из них.

Применение антибиотиков в сельском хозяйстве

Ещё одна проблема, способствующая появлению супербактерий и распространению антибиотикорезистентности, — применение антибиотиков в сельском хозяйстве.

Когда благодаря антибактериальным препаратам люди перестали умирать от септического шока при малейшей ссадине, лекарством заинтересовались ветеринары. Вскоре оказалось, что препараты не только помогают вылечить животных от инфекций, но и стимулируют их рост. Так, на фермах и в крупных хозяйствах стали добавлять антибиотики в корм, чтобы увеличить продажи мяса и других продуктов животноводства.

С продуктами устойчивые к антибиотикам бактерии попали в магазины и на рынки, а дальше «перешли» к людям.

В 2014 году ВОЗ объявила антибиотикорезистентность одной из главных проблем современности.

Бесконтрольный приём антибиотиков

В результате появления внутрибольничных инфекций и использования антибиотиков в сельском хозяйстве устойчивость бактерий стала возникать быстрее, чем появляются новые препараты. «Помогают» этому и пациенты, которые сами назначают себе антибиотики и лечат ими не только бактериальные инфекции, но и вирусные или паразитарные заболевания.

Чем чаще человек использует антибиотики, тем выше вероятность того, что в следующий раз подобрать эффективный препарат будет сложнее.

Такое применение антибиотиков «на всякий случай» приводит к тому, что бактерии проходят ускоренный курс естественного отбора, а выживают после него только сильнейшие.

Поэтому подобрать антибиотик для лечения получается всё реже, а пока врач и пациент «перебирают» препараты, бактериальная инфекция прогрессирует.

Источник: https://antiseptik-dlya-dereva.aystroika.info/novosti/opredelenie-chuvstvitelnosti-k-antibiotikam-raznovidnosti

Чувствительность к антибиотикам s r i. Как расшифровать анализ

 

Бланк ответа на исследование заполняется лаборантом. Вверху бланка пишут, какой материал и откуда был взят. Отмечают фамилию и инициалы пациента, его пол и возраст. Затем пишут, какие бактерии и в каком количестве были выделены. Кровь и моча в норме стерильны.

В кале здорового человека присутствуют лактобактерии, условно-патогенная флора — кишечная палочка, протей, клебсиеллы. Количество условно-патогенной флоры не должно превышать 10 в третьей степени на 1 мл кала. В содержимом зева и носоглотки тоже обнаруживают условно-патогенную флору — стафилококки, стрептококки. Их количество не должно быть больше 10 в четвертой степени на 1 мл слизи.

 

Ниже ставится перечень антибиотиков, к которым определялась чувствительность. Напротив каждого препарата выставляют букву, обозначающую степень чувствительности. Что означает S и R в бланке:

• S — бактерия восприимчива к данному антибиотику, его можно использовать для лечения;
• I — промежуточный вариант, микроб умеренно чувствителен, препарат можно использовать для лечения, если другого лекарства нет или у человека имеется его непереносимость;
• R — микроб абсолютно устойчив к антибиотику, препарат для лечения не подходит.

Анализ выполняют в течение трех дней, поэтому пациенту сначала назначают препарат широкого спектра действия, подходящий по клинике заболевания. Когда же будет получена расшифровка анализа, врач оставляет прежний препарат или меняет его на другой.

Источник: https://antiseptik-dlya-dereva.aystroika.info/novosti/opredelenie-chuvstvitelnosti-k-antibiotikam-raznovidnosti

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам студфайл. Методы определения чувствительности мо к антибиотикам: диффузионный, серийных разведений.

Диффузный:

Материалы: плотная питательная среда АГВ, бумажные диски, пропитанные раствором антибиотика, ЧК МО

Ход работы:

1) На поверхность питательной среды «газоном» с помощью тампона проводят посев ЧК МО

2) На засеянную питательную среду с помощью пинцета накладывают диски, пропитанные антибиотиком

3) Посевы инкубируются в термостате при 37гр 24ч

Учет опыта: с помощью линейки замеряют диаметр зоны торможения роста бактерий. Размеры зон, полученные в опыте, сравнивают с величинами зон задержки роста, указанных в инструкциях, прилагаемых к дискам

Серийные разведения:

Материал: питательный бульон, раствор антибиотика, выделенная от больного ЧК

Ход работы:

1) в пробирку с питательным бульоном вносят двукратноубывающую концентрацию антибиотика (от 50 ед на мл до 0.3 ед на мл)

2) в каждую пробирку вносят ЧК МО

3) инкубация в термостате 24ч 37гр

Контроли:

контроль-культура: мутная

контроль антибиотика — прозрачный

Результаты:

мутный бульон — антибиотик не активен

прозрачный - активен

68. Предмет и задачи санитарной микробиологии

Санитарная микробиология — раздел медицинской микробиологии, изучающий мик­роорганизмы, содержащиеся в окружающей среде и способные оказывать неблагоприятное воздействие на состояние здоровья человека. Она разрабатывает микробиологические; показатели гигиенического нормирования, методы контроля за эффективностью обез­зараживания объектов окружающей среды, а также выявляет в объектах окружающей сре­ды патогенные, условно-патогенные и санитарно-показательные микроорганизмы.